测定蛋白质相对质量的常用方法

测定蛋白质相对质量的常用方法有:

1. SDS-PAGE电泳:首先用SDS破坏蛋白质的二级和三级结构,使其变成线性分子,每个蛋白质分子带相同电荷。然后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,蛋白质会根据其相对质量进行分离,较大的蛋白质迁移较慢。通过标准蛋白质的迁移距离进行计算得到未知蛋白质的相对质量。

2. 等电聚焦电泳:在pH梯度胶中进行电泳,蛋白质会在其等电点汇聚。等电点与相对质量存在关系,所以通过标准曲线可计算得到未知蛋白质的相对质量。

3. 麦克连相对质量检定法:用已知相对质量的标准蛋白质与未知蛋白质的混合物进行沉淀反应,通过测定两者的质量比或者求出混合物中两种蛋白质的摩尔比,计算得出未知蛋白质的相对质量。

4. 超速离心法:将标准蛋白质与未知蛋白质的混合物进行超速离心,通过测定上清中两种蛋白质的质量以及离心参数,计算未知蛋白质的S值,再通过标准曲线算出其相对质量。

5. 静电喷雾电离质谱法:将蛋白质离子化并检测其质荷比,由于质荷比与相对质量成正相关,所以可计算出未知蛋白质的相对质量。这是目前测定相对质量最准确的方法之一。

所以,主要的方法有电泳法(SDS-PAGE和等电聚焦)、沉淀法(麦克连法)、超速离心法和质谱法(ESI-MS)。这些方法准确、快速,可用于蛋白质相对质量的测定和鉴定。但质谱法准确度更高。选择何种方法还需根据实际情况而定。