问：
测定活性时加入的酶量以能抑制反应的50%为最佳,为什么？
答：
在测定酶活性时,加入的酶量选择抑制反应速率50%的量,被称为50%抑制浓度或半数抑制浓度(IC50),这是因为以下几个原因:
1. 这种浓度能够产生可靠的测量值。如果选择过高或过低的浓度,会导致反应速率变化不明显,不易测量和判定,所以选择moderate的抑制量更为合适。50%是一个适中的抑制水平,浓度变化足够产生明显的效应,而又不会完全抑制反应。
2. 可以比较不同条件下酶的活性变化。选用同一个抑制标准,如IC50,可以更好地比较在不同pH、温度、试剂等条件下,酶活性的相对变化。如果每次使用不同的抑制浓度,那么得到的活性变化不仅由条件差异引起,也受抑制浓度选择影响,无法真实反映酶活性的变化。
3. 这种浓度处酶活性变化符合直线关系。在一定浓度范围内,酶活性与抑制剂浓度之间通常呈线性关系,这保证了IC50值具有较好的精度,因浓度变化而产生的酶活性变化也是可预测的。如果选择过高或过低浓度,这种线性关系就不成立,IC50值的精确性会下降。
4. 方便不同实验室间的活性比较。IC50作为一个公认的标准值,不同实验室测得的IC50值可以方便地相互比较,评价不同酶制剂或同一酶在不同条件下的活性,这有利于研究人员交流和结果验证。如果没有统一标准,则不易进行跨实验室的比较。
所以,总的来说,选择50%抑制浓度主要是由于其可以产生精确可靠的测量值,方便活性比较和验证,这为酶活性研究提供了一个统一的评判基准。