western blot等生物学试验中的内参是什么意思

在生物学试验中,内参(Internal control)是指在实验中使用的对照指标,用于证实实验结果的准确性。内参可以控制实验过程中的变量,监控试剂和仪器的性能,确保实验结果的可靠性。

常用的内参有:

1. 房keepers基因产物:如GAPDH、β-actin等。这些蛋白的表达量通常不随细胞状态或实验处理的改变而改变,所以常用其蛋白或mRNA表达水平作为内参。

2. 总蛋白测定:使用例如BCA蛋白定量试剂盒测定样本中的总蛋白浓度,并用以标准化其他指标的表达,避免实验结果受蛋白浓度的影响。

3. 核酸表达:使用稳定表达的rRNA或tRNA基因的表达水平作为内参标准化mRNA的表达。

在western blot实验中,内参蛋白通常在同一膜上与目标蛋白一起检测。在分析结果时,目标蛋白的表达量会标准化为内参蛋白的表达量,从而减除背景差异和局部差异造成的影响,获得更加准确可靠的结果。

举例来说,如果要检测A蛋白在某种处理下的表达变化,同时也检测内参蛋白GAPDH的表达。得到A蛋白相对表达量的fold change时,会使用下式进行标准化:

A蛋白表达量标准化值=A蛋白express量/GAPDH表达量

这样标准化后的fold change更加准确地反映了A蛋白表达的真实改变,减少了背景差异等因素的影响,这就是内参在western blot实验中的作用。

综上,内参是监控实验质量和提高结果准确性的有效手段。理解内参在科研实践中的重要作用和具体应用,可以大大提高研究的可靠性。