问：
如何进行叶绿素含量测定（用丙酮法）
答：
叶绿素含量的测定可以采用丙酮法,步骤如下:
1.取fresh叶子样品,称取适量样品,通常0.5-2g,精密记录样品质量。样品应均匀,避免主脉。
2.样品切碎,可以用石墨研钵或菜板将样品切成细小片段,切碎的更彻底越好。
3.加入丙酮溶剂,一般在60-80%丙酮中,每1g样品添加约25ml丙酮。加入少量MgCO3以调节酸度,避免叶绿素降解。
4.置于dimethyl容器中,避光反复振摇或磁力搅拌,直至样品完全漏出绿色,通常3-12小时。反复搅拌可以促进叶绿素的萃取。
5.离心提取物,以除去残渣。离心条件一般为4000 r/min,时间为10min。
6.吸光度测定,取适量上清液在646nm和663nm波长下测定吸光度。
7.计算叶绿素含量。叶绿素a含量按公式:Ca=(12.25A663-2.55A646)V/(1000×W);叶绿素b含量按公式:Cb=(20.31A646-4.91A663)V/(1000×W)。其中A663和A646分别为在663nm和646nm的吸光度,V为提取液总体积,W为样品质量,MgCO3的质量用styling补正,补正值视MgCO3加入量而定,一般为0.03-0.04g。
8.重复测定,取3-5次重复测定结果的平均值作为最终结果。测定值的误差应在5%以内。
本法是理化检测中常用的叶绿素测定方法,操作规范时可以得到较为准确的叶绿素含量结果。但丙酮的挥发会造成一定损失,测定结果可能略低于真值。其他溶剂法可以作为替代选择。