使用试剂盒检测组织样本中的SOD和LDH，使用的是试剂盒中提供的提取液，想请问样本蛋白怎么检测

使用试剂盒检测组织样本中的SOD和LDH,主要按以下步骤进行:

1. 样本制备:将组织样本解冻至室温,称取适量样本置于离心管中,加入试剂盒提供的组织裂解液,在冰上裂解30分钟。密闭离心15分钟,12000 rpm,4°C条件下离心,取上清液用于后续检测。

2. 标准曲线绘制:使用试剂盒中提供的标准品,按说明书配制不同浓度的标准品溶液,检测各标准品溶液OD值,绘制标准曲线。

3. 样本蛋白浓度测定:用BCA法或Bradford法测定样本上清液中的总蛋白浓度。

4. SOD活性检测:采用无氨基酸苦味酸法检测SOD活性。将不同浓度样本上清液、试剂盒提供的基质和颜色显色剂添加进96孔板中,在412nm波长下测定光密度,根据标准曲线计算SOD活性。

5. LDH活性检测:采用双波段分光光度法检测LDH活性。将不同浓度样本上清液、NADH、底物和INT添加进96孔板中,在340nm和490nm波长下测定光密度,根据光密度之差计算LDH活性。

6. 结果计算:根据样本上清液的蛋白浓度,计算出SOD和LDH的比活性,即活性值/mg蛋白,作为最终结果。

该方法利用试剂盒提供的标准品和仪器,通过分光光度法检测样本上清液中SOD和LDH的活性,结合蛋白浓度得出酶的比活性,实现了对组织样本中SOD和LDH活性的定量检测。关键的是提取液的选择和离心条件,需要完全裂解组织细胞并除去 insoluble inclusion,获得清澈上清液用于后续检测。