问：
目的基因与载体连接之后，需要跑胶看条带大小吗？如果跑胶的话，能看见条带吗？
答：
目的基因与载体 DNA 连接之后,需要进行测序鉴定,通常会采用琼脂糖凝胶电泳来检测重组质粒的大小和proof-of-concept。
如果进行琼脂糖凝胶电泳,可以观察到重组质粒的条带。原因是:
1. 琼脂糖凝胶电泳可以根据DNA片段的大小差异将DNA分离,小的DNA片段会迁移更远,大的DNA片段迁移较短距离。所以可以看到条带的位置变化来判断插入片段的大小。
2. 如果目标基因成功插入载体,会使重组质粒的整体大小增加,导致其在凝胶中的迁移距离变短,条带位置上移。否则,如果未成功插入,重组质粒大小不变,条带位置不会变。
3. 条带的颜色和宽度也可以间接反映载入的片段量的多少。成功插入的重组质粒含有目标基因序列,色带会增宽加深。
4. 可以在凝胶上进行Southern blot,如果探针能与条带上的DNA杂交,进一步证实目标插入片段的存在。
所以,总之进行琼脂糖凝胶电泳实验可以直接观察到条带的位置和色带变化,来判断目的DNA片段是否成功加入到载体,为工程菌的构建提供直接证据。如果未见明显条带变化,则需进行进一步验证,确认是否为插入失败或是载体本身运行问题。
综上,跑胶进行条带检测是验证载体构建的重要一步,如果成功 got 入目的 DNA 片段,是可以直观地看到条带上的差异的。