问:

吖啶酯溶解为什么要用非质子溶剂,它偶联抗体/抗原的机理是什么?

答:
吖啶酯是一种常用的马来酰亚胺类交联剂,用于免疫组化染色以及免疫印迹法中抗体与抗原的交联。它溶解需要用非质子溶剂的原因是:
1. 吖啶酯分子中含有两个亲电基团(羰基和氨基),在水和其他质子溶剂中很容易与溶剂分子发生配位作用,影响其交联活性。非质子溶剂如DMF和DMSO等不能提供质子,所以不会与吖啶酯发生这种相互作用,有利于保持其交联活性。
2. 水等质子溶剂的pH值会影响吖啶酯的化学活性及溶解状态。非质子溶剂不依赖pH,可提供更稳定的环境保护吖啶酯的反应活性。
吖啶酯与抗体和抗原偶联的机理是:
1. 吖啶酯分子中的羰基与抗体/抗原中的赖氨酸残基的氨基组分发生缩合反应,生成酰胺键。
2. 吖啶酯分子中的另一个活泼的氨基与抗体/抗原中的谷氨酸或天冬氨酸残基的羧基发生反应,也生成酰胺键。
3. 通过上述两步骤,一个吖啶酯分子就可在两个抗体/抗原分子之间架起化学桥梁,实现它们的交联偶联。
4. 吖啶酯经过活化处理(如 NHS 酯化),可增加其与蛋白质反应的活性,有利于交联过程。
综上,吖啶酯之所以需溶于非质子溶剂,是为保护其反应活性,使其能有效地与抗体和抗原发生交联偶联反应。希望上述解释能帮助您理解吖啶酯的溶解原理和交联机理。如果还有其它疑问,欢迎再次咨询。