根系活力的测定TTC法为什么要用磷酸缓冲液和37处理？

TTC法(用四氮唑盐酸盐检测根系活力)使用磷酸缓冲液和37°C孵育有以下原因:

1. 使用磷酸缓冲液可以维持根系的pH在中性左右,这是根系活性最高的pH范围。如果pH过高或过低,会影响根系的正常生理代谢,从而影响TTC的还原作用,不能真实反映根系活力。

2. 37°C是根系活性最高的温度范围。在这个温度下,根系的呼吸作用和各种酶的活性最高,这有利于TTC的还原反应。如果温度过高,会导致根系蛋白质变性,丧失活性;如果温度过低,根系的代谢会下降,TTC的还原效率下降,无法准确测定根系活力。

3. 在37°C条件下孵育一定时间,可以让根系组织中的活跃的代谢酶(如脱氢酶)充分作用,将无色的TTC还原为红色的致密红。本实验所用的0.6% TTC溶液和2-3h的孵育时间,可以产生足够的致密红进行定性和定量分析,真实反映根系的活力情况。

所以,磷酸缓冲液提供适宜的pH,37°C提供最适温度,随着孵育时间的延长,TTC的还原程度也越高,最终可以观察到红色的致密红积累,这表明根系活力越高。这就是TTC法使用磷酸缓冲液和37°C孵育的原因。