分离叶绿体的方法

分离叶绿体的常用方法有:

1.差速离心法:这是最常用的方法。首先将植物组织磨碎,然后通过低速离心除去细胞碎片和大的细胞器,得到包含叶绿体的清 supernatent。然后通过高速离心,由于叶绿体密度较大,可以沉淀在离心管底部。最后通过再次低速离心清洗,可以得到较为纯净的叶绿体沉淀。

2.珠光淀粉法:将植物组织磨碎后,在pH7.8的缓冲液中,加入一定量的珠光淀粉和MgCl2,珠光淀粉可以和叶绿体表面结合,增加其密度,利于离心分离。离心后沉淀为叶绿体,然后使用EDTA溶液洗涤去除珠光淀粉,可以得到纯净叶绿体。

3.Percoll密度梯度离心法:首先制备Percoll溶液成不同密度的梯度,然后将叶绿体样本层析在Percoll密度梯度上,离心后,叶绿体会浮在与其密度相匹配的层,可以获得高度纯净的叶绿体。

4.界面活性剂溶解-离心法:一些界面活性剂如Triton X-100可以溶解除叶绿体以外的其他细胞器和细胞膜,然后离心除去这些溶解的细胞碎片,可以得到纯净的叶绿体沉淀。

5.流式细胞仪分选法:将磨碎的植物组织在流式细胞仪上,根据叶绿体的大小和荧光特征进行分选,可以快速获得高纯度的叶绿体。

这些方法各有优劣,可以根据实际需要选择使用,通常结合2-3种方法可以获得较高纯度的叶绿体制备物。分离后的叶绿体可以用于生理和生化实验分析。