用压滴法制作标本片时要注意什么问题

使用压滴法制作标本片时,需要注意以下几个问题:

1. 取材。选择新鲜组织,表面没有污染物,大小适中,厚度均匀。过老或受损组织不宜使用。

2. 固定。取出组织立即置入固定液中,常用的固定液有中性甲醛和醛-醇等。固定液要根据组织类型选择,并控制好固定时间。

3. 去水。取出组织用酒精进行梯度脱水,一般为70%、80%、95%、100%的脱水。每级脱水时间3-5分钟。最后用二氧化碳或丙酮除去残留水分。

4. 清透。用甲苯或二甲苯清除组织中的脂肪。清透液要化学纯,并配制浅蓝色评价色素用于监测清透程度。

5. 浸蜡。选择熔点适宜且化学惰性好的石蜡或油菜籽蜡,加热至熔融后浸入组织。浸蜡时间控制在20-30分钟,取出后在冷却后的蜡块上切成合适厚度。

6. 包埋。将蜡块粘贴在载玻片上,并在其上滴加液态石蜡包埋。包埋完成后放置成薄片状供切片。

7. 切片。将包埋块放入辅助设备中切成超薄切片,通常厚度为5-10微米。切片完成放置在载玻片上备镜。

8. 染色。根据组织类型选择不同染色方法进行染色,常用的有H&E、PAS等。染色后用中性树胶封片,制作完成。

以上是使用压滴法制作标本片需要注意的主要问题,如果操作不当容易导致标本质量下降,希望能为您提供参考。如有需要更详细的步骤和技术请咨询相关专业人士。