用液相色谱测定L-谷氨酸含量 具体要怎么做

使用液相色谱测定L-谷氨酸含量可以按以下步骤进行:

1. 样品准备。取适量L-谷氨酸样品,精确称定质量,并配制成恰当浓度的溶液作为待测样品溶液。

2. 标准溶液准备。准备一定浓度范围的L-谷氨酸标准溶液,作为色谱计量标定用标准溶液。

3. 仪器初始化。打开液相色谱系统,包括进样泵、检测器、工作站等,进行初始化工作,检查仪器状态和各零部件的连接。

4. 选择色谱柱。选择C18reversed-phase色谱柱,或ion exchange色谱柱。L-谷氨酸可以在这两种色谱柱上得到较好分离。

5. 确认检测器类型。一般选择紫外检测器,定制L-谷氨酸的检测波长在195nm或210nm。

6. 确认流动相条件。流动相一般为0.1mol/L醋酸铵溶液,或0.1%磷酸溶液。流速控制在0.8-1.0ml/min。

7. 样品定容并离心。取样品溶液定容, then 4°C下离心10min,取上清液过0.22μm滤膜进行测定。

8. 进样和色谱分离。吸取上清液设定容积(如20μl)进行自动进样,variation系数在2%内。记录色谱图,观察L-谷氨酸峰的保留时间和峰面积。

9. 标准曲线绘制。以峰面积Y,标准溶液浓度X作标准曲线,计算出回归方程和相关系数R。

10. 测定样品含量。将样品溶液色谱图峰面积代入标准曲线方程,计算出样品中L-谷氨酸的含量。

以上步骤完成后,可以精确测定所取样品中L-谷氨酸的含量。需要注意对仪器和试剂的精密控制和管理,保证测试结果的准确性。

液相色谱法是目前测定L-谷氨酸相对简便和精密的方法之一。根据上述步骤,可以成功进行液相色谱分析测定。